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什么是花色苷,它是花色素和糖以糖苷鍵的形式結(jié)合而成的一類化合物。它廣泛的存在植物的花,果實(shí),莖,葉和根等部位,我們能看到它們呈現(xiàn)五顏六色,就是花色苷在細(xì)胞液內(nèi)在不同pH值的條件下的反應(yīng)。在酸性條件下,變成紅色的形式;當(dāng)pH值升高,逐漸的變紫色;當(dāng)接近中性或堿性的時(shí)候,變成藍(lán)色?;ㄉ站哂歇?dú)特的作用,它能清除體內(nèi)的自由基,具有抗炎,保護(hù)視力等作用。
從結(jié)構(gòu)上來看,花色苷有C6-C3-C6骨架,2-苯基色原烯是花色素的母核。分子式:C16H16O6,溶于水。如果花色苷中沒有糖基,就變成花青素了?;ㄉ盏姆€(wěn)定性不高,受影響因素有pH值,氧濃度,酶,金屬離子,溫度和光照等。
花色苷是一類,主要包括矢車菊花色苷,翠雀花色苷,錦葵花色苷,天竺葵花色苷,芍藥花色苷等。
檢測花色苷的某個(gè)成分,實(shí)驗(yàn)室一般采用高效液相色譜(HPLC)法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)法、分光光度法等。
以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測步驟。
樣品提?。悍Q取一定量的樣本,加入適量的提取溶劑,經(jīng)過低溫超聲,離心提取上清液,經(jīng)過微孔濾膜過濾后,待測。
色譜條件:C18色譜柱,甲醇和水為流動(dòng)相,流速1ml/min,紫外檢測器(UV)或二極管陣列檢測器(DAD),可以對(duì)樣品中的花色苷進(jìn)行精確的定量分析。LC-MS是液相搭配了質(zhì)譜檢測器(MS), 不僅可以定量檢測花色苷,還能通過質(zhì)譜圖譜提供花色苷的分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息。
標(biāo)準(zhǔn)曲線:這是一種外標(biāo)法,采用5-7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度點(diǎn)。通過有效的色譜條件,測出各個(gè)濃度點(diǎn)的色譜峰或質(zhì)譜峰。對(duì)峰面積進(jìn)行積分,在表格中對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,可以用函數(shù)公式的形式,繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)r2>0.999。這是前提條件,為樣品的測定和結(jié)果計(jì)算做準(zhǔn)備的。
樣品測定:其實(shí),檢測樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的條件是一樣的。這樣,才能在保持相對(duì)一致的條件下,有測量的可行性。當(dāng)然,如果有用內(nèi)標(biāo)法的也是可以的。有的時(shí)候,用的同一根色譜柱。如果怕反復(fù)測標(biāo)準(zhǔn)品,會(huì)對(duì)樣品有所污染,也可以先測樣品。通過測出來的樣品的色譜峰,積分后,用回歸方程計(jì)算出對(duì)應(yīng)花色苷的含量。